Для определения рода слова “пятнышко” его необходимо поставить в именительный падеж единственного числа, получается форма: “пятнышко” . Тогда в зависимости от окончания в слове “пятнышко” можно определить род.
Слово “пятнышко” употребляется в среднем роде (Потому как в начальной форме слова “пятнышко” окончание [е], [о]).Полный морфологический разбор Cуществительного “пятнышко” находится по ссылке